RNA的保护

RNA的保护
与DNA提取实验相比，RNA的提取实验常常较为困难，这主要是由
于RNA非常容易降解。而造成RNA降解的原因来自内因和外因两个方
面。内因：RNA核糖残基的2’和3’位置带有羟基，易被水解；外
因：生物体内和外部环境中存在大量RNase，并且RNase不易失活，
高温后仍然能够正确折叠恢复活性。因此，从样品的储存、RNA的提取
以及RNA提取完成后的保存，我们都需要格外小心，处处防范RNase对
RNA的降解作用。下面，我们将介绍RNA提取过程中保护RNA的措施。
1、提取前的RNA保护
材料样品中的RNA保护：一般而言，在收集材料样品准备提取RNA
时，我们首先应该选择新鲜的材料，取样后迅速液氮研磨或匀浆处
理，以保证我们所要提取材料中的RNA本身是完整的。如果收集好
材料后，不能马上进行RNA的提取工作，就需要先将材料保存好，
冰冻材料保证低温储存，防止反复冻融，以保证材料中的RNA在保
存过程中不被降解。液氮低温保存法是一种常用的保存方法。先将
材料在液氮中速冻后保存于-70℃冰箱或直接保存在液氮中。
实验室中RNA提取工作区RNase的清除：自然界中的RNase含量非常
丰富，在空气中会有许多RNase存在。因此，在RNA提取实验中应该
辟出RNA提取专区，该区域要进行RNase的清除处理，同时要注意避
免同其它实验区发生交叉污染。
实验耗材、玻璃器皿上的Rnase的清除：所有提取RNA要用到的耗材
和器皿都要进行RNase清除处理。使用无RNase的塑料制品、枪头、
移液器、电泳槽等避免交叉污染，实验台面等要*处理。RNA处
在Trizol试剂中是不会被RNase降解的，但提取后的继续处理过程中应
使用不含RNase的塑料或玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时以
上，塑料器皿可用DEPC处理后再高压灭菌，即可去除RNase。实验所
用的试剂或溶液，必须确保无RNase。配制溶液应使用无RNase的水。
2、提取过程中的RNA保护
组织破碎过程中的RNA保护：选择合适的匀浆方法，尽可能减少匀
浆的时间，保持低温匀浆。在进行细胞裂解之前，一般要先将组织
块破碎。破碎所采用的方法主要有液氮研磨或匀浆处理。液氮研磨
时注意不要让液氮挥发干净，因为液氮可以充分抑制RNase，一旦
液氮挥发干净，就可能造成内源RNase对RNA的降解作用。
细胞裂解过程中的RNA保护：选择合适的裂解液，裂解液的量要足
够，裂解要充分。在裂解液加量一定的情况下，所加入的提取材料
的量就应该按说明书中的比例加入，如果材料太多，会造成裂解不
充分和RNase抑制不充分的双重后果，从而使RNA的得率、完整性
和纯度都受到破坏。
实验人员的注意事项：在提取RNA的过程中，实验操作者本身也应
该注意相关问题。因为我们的手上、唾液中都会有大量的RNase存
在，所以在进行RNA提取实验时，应该戴上口罩，并及时更换手套。
这不仅是对RNA的保护措施，同的也是对实验操作者自身的保护。
3、保存过程中的RNA保护
在经过从材料采集到RNA提取等一系列精心地准备和实验之后，我
们终于得到了高质量的RNA，那么接下来的RNA保存就成为重点
问题，而其中关键的问题就是如何避免保存过程中的RNA降解。
RNAsafe就是在RNA保存过程中常用的一种RNase抑制剂，它能够高
效去除溶液中可能存在的RNase污染，保证RNA完整性不受破坏。
4、后续实验中的RNA保护
RNA的提取归根到底只是一个基础实验，这就意味着我们还要用
RNA来完成许多后续实验，例如：RT-PCR，Northern blot，体外
转录和翻译等。那么在这些后续实验中，也需要对RNA进行持续的保
护，RNasin就是在这类后续实验中的应用广泛的RNase抑制剂。