该试剂盒对经典的异硫氰酸胍抽提RNA的方法进行了改良。改良后的裂解液能迅速裂解细胞，释放出RNA的同时灭活RNase。RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜上，再通过一系列漂洗和离心等步骤进一步将蛋白等杂质去除，最后用RNase-FreeddH2O将RNA从硅基质膜上洗脱。本试剂盒操作快速便捷，安全无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。
操作步骤：
1、取1*106~7个细胞，每管加入500μL裂解液A，加入50μL溶液B用移液枪吹打混匀，RT放置5min。
2、向离心管中加入700μL结合液C（使用前请先检查是否已加入异丙醇），上下颠倒充分混匀。
3、向吸附柱中加入600μL混合液，静置1min。4℃12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管（收集管留下，用于步骤5使用）中。
备注：由于体积过大，需二次上柱，再将剩余混合液重复步骤3
4、将吸附柱放到新的干净的2mL收集管上，在吸附柱中加入500μLRNA洗脱液，4℃，12000rpm离心2min，收集滤液，扔掉吸附柱。
5、在滤液中加入700μL结合液C，用移液枪吹打混匀后加入到新的吸附柱中，（使用步骤3的收集管），4℃，12000rpm离心2min，弃滤液。
备注：由于体积过大，需二次上柱，再将剩余混合液重复步骤5
6、向离心管中加入600μL漂洗液1（使用前请确认是否已加入无水乙醇），静置1min，4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
7、向离心管中加入600μL漂洗液2（使用前请确认是否已加入无水乙醇），4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
8、4℃，12000rpm离心2min，将吸附柱敞口室温放置3min，以除去多余的乙醇。
9、将吸附柱放到一个干净的离心管上，向吸附柱中加入30-100μL洗脱液，室温放置2min，4℃，12000rpm离心2min，得到RNA溶液，RNA保存于-80℃。
注意事项：
1、所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2、洗脱液的体积不应少于30μL，体积过少会影响提取效率，RNA产物应保存在-80℃，以防RNA降解。
3、RNA浓度及纯度检测：提取的RNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260/OD280比值应为2.0-2.2。 | 