Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33258的大激发波长为346nm，大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，大激发波长为352nm，大发射波长为461nm。本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。
使用说明：
使用前用生理盐水或PBS将Hoechst 33258染色液稀释100倍，即为工作液。
1. 对于固定的细胞或组织： a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则*行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。 b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258工作液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的工作液，混匀。室温放置3-5分钟。 c. 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。 d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 2. 对于活细胞或组织： a. 加入适当量Hoechst 33258工作液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1mL工作液，对于96孔板一个孔需加入100μL工作液。 b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。
