细胞培养的缓冲体系用于细胞培养的缓冲盐溶液主要分为两种类型：一种是在大气条件下用于平衡的缓冲盐溶液，另一种是当气相中含有5-10%的二氧化碳时用于平衡的缓冲盐溶液。由于含有Hank缓冲盐的培养基的磷酸pKa值近于生理pH值，因此适于大气条件下的平衡。这些培养基含有适于羧化作用和类似生物过程的碳酸氢根离子。在二氧化碳培养箱中使用Hank缓冲盐会导致培养基的pH...

点突变相关的基因型mutS（Mutator）功能：mutS基因表达的蛋白具有识别DNA上错配序列的功能，并能修复其错配序列（GC→AT），防止基因突变。mutS基因的变异导致DNA的错配序列不能得到修复，容易发生基因突变，这对于利用点突变进行基因改造是有利的。dut（dUTPase）功能：dut基因表达脱氧尿嘧啶三磷酸核苷酸水解酶（dUTPase），它能水解...

甲基化相关的基因型dam（DNAadeninemethylase）功能：dam基因表达DNA腺嘌呤甲基化酶，它能催化特异序列GATC中A的甲基化，保证DNA免受限制性核酸内切酶MboI的切断，同时在DNA复制时也起一定的辅助作用。dam基因的变异导致腺嘌呤（A）甲基化酶活性的缺失，使腺嘌呤（A）不被甲基化，易于获得非甲基化质粒。dcm（DNAcytosine...

基因重组相关的基因型recA（Recombination）功能：recA基因表达ATP依赖型DNA重组酶，它在λ噬菌体与基因组DNA的溶原重组时起作用，同时具有对DNA放射性损伤的修复功能。由recA基因的变异所产生的基因型使同源或异源DNA的重组不能进行，保持插入DNA的稳定性，对DNA的转化有利。一个菌株的基因型如果是recA，则说明此菌株的表现型是重组...

Northernblot技术经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMS...

植物组织RNA提取的难点及对策从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。a）*Y（WL从文献报道上看，有许多植物就是由于未能...

复苏方法1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。4．低速离心（500～...

蛋白质提取的方法总汇1、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtri...

几种常用转化细胞和转化技术1）致癌化学物转化细胞：转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验1．取材：妊娠后第13天取材，取数个同窝胚胎，去头和内脏，在无菌条件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分钟，滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/培养瓶中，接种密度10～20×106/75cm，37℃培养2...

如何提高RT-PCR反应体系的灵敏度：1、分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂如EDTA或SDS等，以及尽可能减少基因组DNA污染。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的大值。2、使用无RNaseH活性的逆转录酶在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产...

影响质粒提取的因素：质粒提取的得率和质量与很多因素有关，如宿主菌的种类和培养条件、细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、抗生素、吸附柱的吸附量等。宿主菌种类质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中，多数情况下我们是从大肠杆菌中提取质粒。大肠杆菌的菌株不同会影响质粒提取的质量。从宿主菌如DH5α和*0中可以得到高质量的质粒DNA。HBl01和它的衍生菌株，如TG...

质粒提取原理及流程：较常用的质粒DNA提取方法有3种：碱裂解法、煮沸法和去污剂（如Triton和SDS）裂解法。前两种方法比较剧烈，适用于较小的质粒（15kb）。碱裂解法是一种应用为广泛的制备质粒DNA的方法，其原理为：染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发...

质粒DNA分离和纯化：纯化要求质粒DNA中不应存在对后续实验中的酶活性有抑制作用的有机溶剂分子或过高浓度的金属离子。避免其它生物大分子如蛋白质、多糖、脂类、基因组和RNA的污染。不同的后续实验对于质粒纯度的要求不同，常规的分子生物学实验（如酶切、测序等）普通纯度的质粒即可满足实验，而对于转染实验，要求质粒的纯度较高（如高纯度或无内毒素）。可以选择不同的质粒提...

Lowry法蛋白浓度测定目录号规格价格PC0030-10001000T280.00产品简介：Lowry法包括两步反应：*步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将Folin试剂还原，产生深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为5～100μg/ml蛋白质。Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有...

BCA蛋白浓度测定目录号规格价格PC0020-500500T280.00产品简介：Bicinchoninicacid（BCA）法是在世界上常用的蛋白浓度检验方法之一BCA法基础上改进而成。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu+。两分子BCA与一个Cu+螯合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸...