Product classification
Relevant Articles
产品简介
储存条件 | 2-8℃,避光,有效期6个月 |
规格 | 10ml |
单位 | 瓶 |
流式细胞术检测细胞DNA含量,通过染色定量分析DNA,亦可通过荧光显微镜观察形态变化。
AO属于三环杂芳香燃料,可以标记 DNA、RNA,属于异染性荧光染 料。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核 DNA 和 RNA 染色。因此 AO 常用于细胞内 DNA 和 RNA 进行检测。AO 与核酸结合方式主要有:1、插入性结合,AO 嵌入核酸双链的碱基对之间, 这种结合方式主要为 AO 与 DNA 的结合,其荧光发射峰为 530nm,激发后呈绿色荧光;2、静电吸 引,带正电荷的 AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要为 AO 与 RNA 的结合,其荧光发射峰为 640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧 光。因此,AO嵌合到双链 DNA 分子中显绿色,与 DNA 单链或 RNA 结合时发桔黄色或橙红色 荧光。
AO染色液(1mg/ml)为储存液,使用时应稀释到合适浓度后使用。染色后在荧光显微镜下观 察,AO可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固 缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。AO使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片 颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。AO染色常与 EB 染色合用双染,因 EB 只染死细胞使 之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料
荧光显微镜,低速离心机 ,PBS,细胞计数板 ,载玻片、盖玻片
操作步骤(仅供参考):
1、 收集细胞(采用流式细胞仪检测时,应先固定细胞),用 PBS 清洗细胞 1 次,计数并调节细胞浓 度至 106/ml。
2、 取适量的细胞悬液,加入 AO Stain(1mg/ml),使 AO 终浓度为 8.5~17µg/ml,轻轻混 匀。
3、 室温避光染色 15~20min,滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长 488nm,阻断滤光片波长 515nm),计数并拍照。
注意事项:
1、 AO Stain(1mg/ml)不含破膜剂,较少单独使用。
2、 AO染色常与 EB 染色合用,可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
3、 如有低温离心机进行离心效果更佳。
4、 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
5、 试剂有一定毒性,请小心操作。
6、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
备注:以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.